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慢病毒包裝

賽業生物采用第3代重組慢病毒包裝系統制備病毒顆粒。為了增加慢病毒的安全性能,病毒制備所必需的元件序列被拆分到4個質粒當中,分別是:
11個編碼目的基因的慢病毒轉移質粒。目的基因兩側各有一個LTR(long terminal repeat)序列,LTR序列促使目的基因整合到目的細胞基因組里。為了提高安全性能,轉移質粒的3’ LTR缺失了部分序列,使得整合后的病毒基因組失去自我復制能力。
22個包裝質粒。其中一個質粒編碼Rev, 另外一個質粒編碼Gag和Pol。
31個編碼包膜蛋白的質粒。

利用上述質粒包裝出來的重組慢病毒顆粒,被稱為自我失活VSV-G假型慢病毒(self-inactivating VSV-G pseudotyped lentivirus)。

 

  

慢病毒包裝

生產攜帶目的基因的重組慢病毒顆粒,過程如下圖:

首先將轉移質粒、包裝質粒和包膜蛋白質粒轉染到293T細胞。更換新鮮的培養基后,繼續培養48~72小時。收集培養液,進行離心濃縮后,就可得到轉導細胞級別的病毒顆粒。如果您想獲得注射動物級別的超純病毒顆粒,可以利用蔗糖超速離心進一步去除雜質,從而獲得純度更高的病毒顆粒。    

 

質量控制

我們會對每一批病毒都進行滴度檢測,嚴格控制質量,讓你百分百放心。針對用攜帶熒光報告基因的轉移質粒生產的病毒,我們會先用熒光法檢測病毒的轉導率,如能達到使用要求,再進一步采用qPCR法檢測病毒滴度。

 

服務明細

服務 交付標準 周期 推薦用途
標準規格包裝 冷凍病毒 (滴度: ≥1×108 TU/ml, 體積: 1ml) 2-3周 細胞轉導
大規格包裝 冷凍病毒 (滴度: ≥1×109 TU/ml, 體積: 1ml) 2-3周 細胞轉導

 

賽業生物不僅僅提供基因表達慢病毒定制服務,還提供shRNA干擾慢病毒和gRNA慢病毒定制服務。您可根據實驗需要,選擇一款適合于您的重組慢病毒來開展基因功能研究工作。

  

CRISPR/ Cas9基因敲除慢病毒載體

  

CRISPR基因敲除慢病毒系統包括兩個載體:

1gRNA慢病毒載體

 

gRNA慢病毒載體由慢病毒基因組序列和細菌質粒序列構成。細菌質粒序列含有一個Ampicillin抗性基因和一個高拷貝復制子pUC ori。慢病毒基因組序列是從元件5’LTR開始,到3’LTR結束。

 

2Cas9慢病毒載體

 

Cas9慢病毒載體利用CBh啟動子共表達humanized Cas9基因和抗藥性基因。gRNA慢病毒載體利用U6 promoter表達gRNA,同時攜帶了一個表達抗藥性基因的基因表達盒子。在設計gRNA慢病毒載體時,請選擇合適的抗藥性基因,兩個載體需要不同的抗藥性基因配套使用才能篩選出共表達gRNA和Cas9的細胞。

   

質量控制

我們會對每一個CRISPR/Cas9慢病毒載體挑克隆,并測序gRNA片段。測序正確后,再進行酶切鑒定,酶切鑒定合格后交付。

 

 

 

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